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乳鐵蛋白是近幾年開發研究速度最快的營養添加劑之一，不僅具有廣譜抗菌，抗病毒感染作用，還能調節體內鐵平衡、調解骨髓細胞的生成等。乳鐵蛋白在國內外食品加工中的應用日益廣泛，故有關乳鐵蛋白的安全生產和使用是需要重點關注的問題。
安譜實驗根據《GB 5009.299-2024 食品安全國家標準 食品中乳鐵蛋白的測定》，使用 Poly-Sery 肝素親和柱（SBEQ-CC65001）對牛奶和奶粉進行樣品凈化結合高效液相色譜（Athena C4 液相色譜柱，LAEQ-461579）測定乳鐵蛋白。實驗結果表明 PolySery 肝素親和柱回收率高，性能穩定，在保證高回收率的同時流速適中，可以顯著節約工時和操作時間。
產品特點
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1、性能優異：柱容量和回收率滿足標準要求，性能穩定，平行性優異；
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2、流速適中：CNW 小柱流速與市面上現有品牌小柱相比，快 1~1.5 倍，在保證回收率效果的同時，能夠節約工時和操作時間，節省人力物力；
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3、適用范圍廣：適用于牛奶、奶粉類等基質，同時適用于GB 5009.299-2024與NY-T 4439-2023標準方法，能夠滿足不同檢測的需要。
一、樣品前處理
溶液配置：
u磷酸鹽緩沖液Ⅰ（洗脫液）：
將磷酸鹽緩沖包Ⅰ450 mL 純水溶解，用10 M 氫氧化鈉溶液調節pH至 7.5±0.2，定容至 500 mL，轉移至潔凈密封的試劑瓶中。
磷酸鹽緩沖液Ⅱ（提取液）：
將磷酸鹽緩沖包Ⅱ用 900mL 純水溶解，用磷酸溶液調節 pH 至 7.5 ± 0.2，定容至1L，轉移至潔凈密封的試劑瓶中。
樣品提取：
牛奶：
稱取 5g 試樣于燒杯中，加標后，加入適量磷酸鹽緩沖液Ⅱ提取，分次將樣品轉移至 25 mL 容量瓶，用磷酸鹽緩沖液Ⅱ 定容至刻度，充分混勻后轉入離心管 5000 r/min 離心 15 min，取樣液待凈化。
嬰兒配方奶粉：
稱取 5g 試樣于燒杯中，加標后，加入溫熱 ( 溫度不超過 50 ℃ ) 的磷酸鹽緩沖液 Ⅱ，攪 拌使樣品溶解，冷卻至室溫，分次將樣品轉移至 50 mL 離心管中并用磷酸鹽緩沖液 Ⅱ 定容至刻度，充分混勻后轉入離心管中，取 40 mL 溶液在室溫條件下 5000 r/min 離心 15 min，取樣液待凈化。
柱容量驗收：
上樣加標 2 mg。
SPE 小柱操作：
肝素親和柱（SBEQ-CC65001，6 mL/30 pcs）
活化：5 mL 磷酸鹽緩沖液Ⅱ；
上樣：10 mL 上清液（1 d/2 s）；
淋洗：10 mL 磷酸鹽緩沖液Ⅱ，排干；
洗脫：4.5 mL 磷酸鹽緩沖液Ⅰ，排干，收集全部洗脫液。磷酸鹽緩沖液Ⅰ定容至 5 mL 混合，過 0.22 μm 濾器后，進樣，待HPLC/UV 檢測。
注意事項：
①上樣要注意控制流速，流速過快可能造成10%-15% 左右損失；
② 進樣前的針式濾器，推薦采用親水PVDF濾器、親水PTFE濾器及水相聚醚砜針式濾器進行過濾，不推薦尼龍針式濾器，可能造成40%-60%的損失。
二、儀器條件
液相色譜：ACQUITY UPLC超高效液相色譜儀
a) 色譜柱：Athena C4液相色譜柱（LAEQ-461579，4.6*150 mm, 5 μm, 300 A, 含柱效液）；
b) 流速：1.0 mL/min
c) 流動相：0.1%三_氟_乙_酸，乙腈梯度洗脫，詳情見下表。
表 1-1 梯度洗脫表
三、實驗譜圖
圖 1-1 100 ppb 標準溶液譜圖
圖 1-2 牛奶樣品加標譜圖
圖 1-3 嬰兒配方奶粉樣品加標譜圖
四、實驗數據
表 1-2 水樣加標回收率數據
五、實驗結論
參照GB 5009.299-2024使用Poly-Sery 肝素親和柱進行柱容量驗證及牛奶基質、嬰兒配方奶粉基質乳鐵蛋白加標實驗，可以看出，肝素親和柱的柱容量回收率超過 95%，且嬰配奶粉基質回收率高于其他國產品牌， RSD 值小于 5%，平行性優異，柱容量滿足國標要求。說明 CNW 小柱具有優異的性能。
六、產品推薦
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